MMP-12蛋白包涵体复性时折叠状态核磁共振图谱与荧光光谱研究

摘要：

MMP-12是癌症治疗药物靶标.为了更好研制新药,需要大量制备MMP-12,但MMP-12在大肠杆菌中以包涵体形式表达.因此如何优化蛋白复性过程是大量获取MMP-12蛋白的关键.采用核磁共振、稳态荧光法、外源性ANS（8-anilinol-naphthalenesulfonic acid）荧光探针三种方法监控MMP-12变性蛋白的再折叠过程,以探究其复性折叠机制.研究发现MMP-12再折叠中点值与对应的尿素浓度几乎相等（Cm≈4,mid-point of transition）.不同尿素浓度中MMP-12的二维1H-15NHSQC（heteronuclear single quantum correlation）谱图显示,尿素浓度从4mol/L降低到3mol/L是MMP-12蛋白复性折叠的关键步骤.据此我们将MMP-12蛋白复性从常规的梯度透析复性方法改进成等容透析复性法（即确保尿素从4mol/L到3mol/L的浓度变化缓慢）,实现复性收率提高一倍.

关键词：核磁共振、稳态荧光、ANS荧光探针、MMP-12、复性折叠

所属期刊栏目：70

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家重点基础研究发展计划973计划2009CB918600

在线出版日期：2012-06-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：453-458