一种实用的基于化学发光和磁性纳米颗粒的E.coli O157:H7免疫鉴定方法
化学发光磁酶免疫已经被应用于检测病原体,但是由于针对相应病原体的抗体筛选和修饰等的步骤耗时费力,不适于对多种病原体进行筛查.制备了兔抗大肠杆菌(E. coli)O157:H7的免疫磁性纳米颗粒,富集病原菌后与鼠抗E.coli O157:H7的单克隆抗体形成双抗夹心,采用碱性磷酸酶标记的马抗鼠IgG与单抗结合,加入碱性磷酸酶的化学发光底物试剂3-(2'-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3"-羟基)苯-1,2-二氧杂环丁烷磷酸检测化学发光.实验研究了底物缓冲液、碱性磷酸酶浓度对化学发光强度的影响,比较了NaBH_4和甘氨酸对免疫磁珠剩余活性醛基的封闭效果以及本方法检测E.coli O157:H7的特异性和敏感性.结果表明,碱性磷酸酶与底物在c缓冲液中反应的化学发光强度最高,碱性磷酸酶浓度决定了化学发光的强度和持续时间,NaBH_4对活性醛基的封闭效果优于甘氨酸,以D群宋内氏志贺氏菌、B群福氏志贺氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和霍乱弧菌及E.coliTop10f为对照的比较实验显示,该检测方法具有良好的特异性,以1 mL的菌液为检测体积时对E. coli O157:H7的检测灵敏度为10~3cell/mL,整个方法的检测时间约为3 h.该方法适用于对多样本进行筛查.
E.coli O157、H7、酶联免疫检测法、化学发光、磁性纳米颗粒
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O6(化学)
国家自然科学基金90606027;60801007;国家高技术研究发展计划863计划2007AA022007;科技部科研项目2010CB933903;国家艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治科技重大专项2009ZX10004-311;教育部人文社会科学规划项目20080430160;江苏省博士后科研资助计划0801004B;333高层次人才培养工程资助项目[2007]16
2010-04-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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