金属硫蛋白家族内的结构域拼接

摘要：

金属硫蛋白(Metallothioneins,MTs)由结构独立且功能有明显区别的β,α两个结构域组成,神经生长抑制因子Neuronal Growth Inhibitorx Factor,GIF)又名金属硫蛋白-Ⅲ(MT-Ⅲ),是神经系统中第一个被鉴定的具有神经元生长抑制功能的蛋白,而β-结构域为其功能结构域.为深入系统地研究MTs,尤其是GIF及其结构域的结构与功能,我们构建了金属硫蛋白家族内结构域拼接体βGIF-αXIT-1(βⅢ-α1)和βMT1-αGIF(β1-αⅢ ):PCR扩增得各个结构域的 cDNA序列,酶切后克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,经发酵、诱导表达、亲和层析、凝血酶切和进一步纯化,得率约为80 mg蛋白/L菌液.测其电泳行为、氨基酸组成、质谱、金属巯基含量等,证明得到了目的蛋白.紫外吸收图谱和圆二色性图谱显示,结构域拼接体拥有金属硫蛋白家族成员的特征金属巯基簇结构域初步功能实验表明,βⅢ-α也具有抑制神经元生长的功能.

关键词：金属硫蛋白、神经生长抑制因子(GIF)、结构域拼接、发酵、结构、功能

所属期刊栏目：59

分类号：O6(化学)

资助基金：国家科技攻关项目96-C02-01-09

在线出版日期：2004-08-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：1769-1775