降钙素基因相关肽通过Hippo通路调控小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的实验研究
目的:前期研究发现降钙素基因相关肽(CGRP)能够促进成骨细胞的生物学活性,为了进一步揭示CGRP在骨修复中的作用,检测CGRP对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响,并对Hippo通路在这个过程中的作用进行了初步探讨。方法在体外诱导培养的BMSCs中加入不同浓度的CGRP,处理48?h后测试碱性磷酸酶(ALP)活性,以筛选的优势浓度;处理7?d后进行茜素红染色,分别检测细胞的分化情况。应用Western?blot检测CGRP作用于BMSCs后,Hippo通路核心分子Mst1/2蛋白磷酸化的表达水平;利用Hippo通路抑制剂维替泊芬(Verteporfin)阻断下游Yap信号,逆转录聚合酶链反应检测其对成骨相关因子Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、Runt相关转录因子2(Runx2) mRNA的表达影响。结果 ALP活性检测结果显示,与空白对照组相比,10-9、10-8、10-7?mol·L-1浓度范围的CGRP都能显著促进小鼠ALP活性的增加(P<0.05),以10-8?mol·L-1浓度的CGRP为最佳刺激浓度。用10-8?mol·L-1浓度的CGRP处理后,茜素红染色显示钙化结节明显增多。CGRP能够显著上调p-Mst1/2蛋白的表达(P<0.05);当运用了抑制剂Verteporfin时,显著降低了CGRP诱导的Runx2、ColⅠ?mRNA的表达(P<0.05)。结论 CGRP能够促进小鼠BMSCs的成骨分化,且Hippo信号通路介导了CGRP作用于小鼠BMSCs成骨分化的过程。
降钙素基因相关肽、骨髓间充质干细胞、Hippo信号通路
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Q 254
国家自然科学基金81371110,81300873Supported by:The National Natural Science Foundation of China81371110,81300873
2016-06-20(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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