生物钟基因Per1对人口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡、细胞周期和体内成瘤的影响及机理
目的：探讨生物钟基因Per1对细胞周期相关基因的调控作用，以及对人口腔鳞状细胞癌细胞SCC15增殖、凋亡、细胞周期和体内成瘤的影响。方法构建3组针对Per1?RNA的短发夹RNA（shRNA）慢病毒重组质粒，转染SCC15细胞，用蛋白质印迹法（Western?blot）及实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测筛选RNA干扰作用最强组为实验组，对照组（Control-shRNA）为对任何基因均无干扰效应的shRNA序列的质粒，空白组为未做任何处理的SCC15细胞。用qRT-PCR检测各组细胞中细胞周期相关基因Per1、p53、Cyclin?D1、Cyclin?E、Cyclin?A2、Cyclin?B1、CDK1、CDK2、CDK4、CDK6、p16、p21、Wee1、cdc25、E2F、Rb1?mRNA的表达；用流式细胞仪检测各组细胞增殖、凋亡和细胞周期分布；将实验组和空白组细胞分别接种于裸鼠背部皮下，观察成瘤情况。结果成功构建了3组Per1-shRNA慢病毒质粒，通过qRT-PCR和Western?blot证明Per1-shRNA-Ⅰ组沉默效果最佳，作为实验组。Per1-shRNA-Ⅰ组中Cyclin?D1、Cyclin?E、Cyclin?B1、CDK1和Wee1?mRNA的表达水平高于Control-shRNA组和SCC15组（P<0.05），p53、Cyclin?A2、p16、p21和cdc25?mRNA的表达水平降低（P<0.05）；Control-shRNA组和SCC15组中各基因mRNA的表达水平无差异（P>0.05）。CDK2、CDK4、CDK6、E2F和Rb1?mRNA的表达水平在3组中均无统计学差异（P>0.05）。Per1-shRNA-Ⅰ组中细胞增殖指数高于Control-shRNA组和SCC15组（P<0.05），凋亡指数降低（P<0.05），S期的细胞数降低（P<0.05），G2/M期的细胞数增加（P<0.05）。Control-shRNA组和SCC15组细胞的增殖指数和凋亡指数无统计学差异（P>0.05）。Per1-shRNA-Ⅰ组细胞体内成瘤能力显著增强（P<0.05）。结论生物钟基因Perl是重要的抑癌基因，Perl能调控下游众多的细胞周期基因，其表达变化影响细胞周期进程、增殖和凋亡的平衡失调及体内成瘤能力，对Per1深入研究有可能进一步明确癌症的发生发展机制，为癌症的治疗提供新的有效分子靶点。
生物钟、Per1、细胞周期、基因、口腔癌
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R 739.8
2016-06-20（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共7页
255-261
