亚甲基四氢叶酸还原酶基因在小鼠胚胎腭突间充质细胞中沉默效应的研究

摘要：

目的 构建亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)特异性小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,体外观察其对MTHFR基因的沉默作用.方法 采用基因克隆技术,将合成的特异性MTHFR RNA干扰寡核苷酸序列插入真核表达载体PsiRNA-Hh1neo_G2,构建MTHFR siRNA真核表达载体.应用核转染技术将PsiRNA-MTHFR重组质粒分别导入原代培养的小鼠胚胎腭突间充质(MEPM)细胞.48 h和5 d后用实时定量聚合酶链反应(Real-Time PCR)和Western blot技术检测MEPM细胞内MTHFR mRNA及蛋白水平的表达情况.结果 成功构建PsiRNA-MTHFR真核表达载体.经检测48 h和5 d后转染PsiRNA-MTHFR的MEPM细胞MTHFR mRNA及蛋白表达均显著下调.结论 构建的RNA干扰真核表达载体能明显干扰MTHFR mRNA及蛋白的表达,为进一步研究MTHFR的功能以及其调控胚胎腭突融合的机制奠定基础.

关键词：亚甲基四氢叶酸还原酶基因、RNA干扰、真核表达

所属期刊栏目：27

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30371552

在线出版日期：2009-08-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：244-247