基于LAMP技术的弧菌快速检测方法的建立

摘要：

研究基于弧菌属16S rRNA保守基因片段设计引物,利用恒温条件进行扩增,建立并优化了弧菌属环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,在LAMP检测方法最优条件下,验证LAMP方法的特异性、灵敏度和实际应用性.结果表明:最佳反应条件为反应温度61℃、Mg2+、dNTPs和甜菜碱的浓度分别为4 mmol/L、1.8 mmol/L和0.4 mol/L;在最佳检测条件下,以4种弧菌(溶藻弧菌、哈维氏弧菌、副溶血弧菌、创伤弧菌)和8种其他菌株作为验证模板,发现该方法仅对弧菌有阳性扩增结果,证明该方法具有较高的特异性;同时,该方法对创伤弧菌DNA的最小检出量为940 fg/μL,其检测下限比常规PCR法降低了2个数量级.该研究成功建立了弧菌属细菌的快速检测方法,且方法具有良好的特异度和敏感度,为弧菌的快速检验提供了技术支撑.

关键词：环介导等温扩增技术、弧菌、快速检测、方法建立

分类号：S943(水产保护学)

资助基金：福建省属公益类科研院所基本科研专项;福建省属公益类科研院所基本科研专项

在线出版日期：2022-06-17（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1-5