利用CRISPR/Cas9技术构建猪的LDLR基因敲除细胞

摘要：

利用CRISPR/Cas9系统构建猪的低密度脂蛋白受体基因LDLR敲除细胞:根据 NCBI数据库猪LDLR基因(Gene ID为 396801)序列设计sgRNA靶位点,构建敲除打靶载体,通过电转染猪胎儿成纤维细胞,经G418筛选获得细胞克隆,进行 PCR 扩增和 T 载体克隆测序,经序列比对计算基因敲除效率.结果表明,依照CRISPR/Cas9系统GN20GG法则,在LDLR基因第一外显子上设计 1条sgRNA,测序结果显示靶序列已正确连接,转染、筛选后共获得 30个单细胞克隆,23个测序成功,其中有 7个细胞克隆为LDLR基因敲除细胞克隆,敲除效率为 30.4%.

关键词：猪、低密度脂蛋白受体基因、基因敲除、CRISPR/Cas9系统

所属期刊栏目：49

分类号：S828.9;Q78(家畜)

资助基金：国家自然科学基金;国家自然科学基金;云南省科技计划项目

在线出版日期：2023-09-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：468-471