柑橘黄龙病菌分泌蛋白04580基因的克隆及原核表达

摘要：

为进一步了解柑橘黄龙病菌亚洲种CLas的致病机理,从Prasad预测的166种分泌蛋白中选取1个在柑橘植株中表达量较高的CLIBASIA–04580基因进行研究.提取感染柑橘黄龙病的柑橘叶片总DNA,经PCR扩增得到CLIBASIA–04580基因,切胶回收PCR产物,双酶切连接到pET–28α载体上,使用菌落PCR和限制性内切酶双酶切鉴定筛选阳性克隆;转化大肠杆菌BL21(DE3),用0.5、1.0、1.5、2.0 mmol/L的异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达融合组氨酸标签的CLIBASIA–04580重组蛋白,聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS–PAGE)检测重组蛋白的表达水平,再用蛋白纯化镍柱进行纯化.结果表明,携带组氨酸标签的CLIBASIA–04580重组蛋白得到表达,且异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度为1.5 mmol/L时相对表达量达到峰值,通过SDS–PAGE凝胶分析,与未经过镍柱纯化的蛋白原液比较,可知纯化了CLIBASIA–04580重组蛋白.

关键词：柑橘黄龙病菌、分泌蛋白、原核表达、蛋白纯化

所属期刊栏目：48

分类号：S436.661.1+2;Q786(病虫害及其防治)

资助基金：国家重点研发计划;湖南省科技厅重点研发计划;湖南农业大学双一流学科建设项目

在线出版日期：2022-07-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：294-297