柑橘衰退病毒基因RNAi载体的构建

摘要：

基于转化病毒基因介导抗性,通过在植物表达载体pCAMBIA 2301上插入启动子–内含子–终止子的方式,构建一种含有发夹结构的、通用型强的RNAi载体骨架结构;以柑橘衰退病毒(citrus tristeza virus,CTV)的p25、p20和p23基因保守序列为模板设计正向片段和反向片段,先后与骨架载体连接,成功构建了3个RNAi载体(分别命名为ds2301–p25、ds2301–p20和ds2301–p23),并将载体ds2301–p23注射入墨西哥莱蒙叶片.制作p23基因的地高辛标记探针,用Northern杂交检测是否有siRNA产生.结果表明:用Northern杂交可以检测到p23特异的siRNA,在墨西哥莱蒙叶片中瞬时表达的农杆菌ds2301–p23可以发生RNAi,表达有效的siRNA.本研究中构建的骨架载体可以广泛用于RNAi载体的构建,含有柑橘衰退病毒基因片段的3个载体可以用于基因功能分析及具有CTV抗性的柑橘种质资源获得.

关键词：柑橘、柑橘衰退病毒、RNAi载体、载体构建

所属期刊栏目：43

分类号：Q946.8(植物学)

资助基金：国家自然科学基因项目300900972 , 3157211;公益性行业农业科研专项201203076–06;湖南省研究生科研创新项目CX2013B290

在线出版日期：2017-05-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：140-144