基于pHY300PLK的分泌表达载体的构建

摘要：

用PCR、酶切、连接方法将地衣芽孢杆菌耐高温α-淀粉酶基因(amy)表达单元(包括启动子、信号肽及淀粉酶基因)克隆到pHY300PLK中,并用反向PCR、同源重组方法,去除重组质粒的氨苄抗性基因,以利用α-淀粉酶基因的启动子和信号肽高效表达自身蛋白及外源蛋白.结果表明:连入了α-淀粉酶表达单元的pHY300PLK,即pAMY质粒能够分泌表达α-淀粉酶,且去除了氨苄抗性基因的pAMY质粒,即pAMY1质粒能更有效的表达α-淀粉酶；将纤维素酶基因连接到pAMY1质粒中淀粉酶信号肽的下游,得到的重组质粒pCEL能分泌表达纤维素酶,表明α-淀粉酶基因的启动子和信号肽不仅能启动自身蛋白的表达,也能启动外源蛋白的表达;重组菌的生长情况与质粒拷贝数的比较表明,与PAMY质粒相比去除了氨苄抗性基因的pAMY1质粒对重组菌的生长没有影响,且pAMY1质粒在重组菌的复制效率更高,能更高效的表达蛋白,以上结果证明pHY300PLK克隆质粒已成功改造成表达质粒,下一步可用于更多外源基因的分泌表达.

关键词：地衣芽孢杆菌、α-淀粉酶、同源重组、表达质粒、纤维素酶、分泌表达

所属期刊栏目：39

分类号：Q81(生物工程学(生物技术))

资助基金：现代农业产业技术体系建设专项CARS-09-06B;中央级公益性科研院所基本科研专项2012ZL034;北京市自然科学基金项目5083025

在线出版日期：2013-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：52-57,111