水稻L-半乳糖内酯脱氢酶基因的克隆和原核表达及抗体的制备

摘要：

应用RT-PCR技术从水稻叶片中克隆了水稻L-半乳糖内酯脱氢酶(GLDH)的全长基因.序列分析表明,水稻GLDH基因全长1 752 bp,亚克隆其部分成熟蛋白编码基因(789 bp),利用基因重组技术构建了E.coli/ pET30a-GLDHe,经酶切鉴定,DNA测序,证实重组质粒构建正确;将重组质粒转化大肠杆菌Rosseta,IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析证实表达出相对分子质量约为36 000的蛋白.用原核表达蛋白作为抗原免疫家兔制备抗体,用Western blot检测抗体的特异性及效价,结果表明,抗体血清效价为1∶1 000,在加IPTG诱导后的菌液中可以检测到相应的蛋白条带((相对分子质量为36 000)),在水稻叶片样品中能检测到1条相对分子质量为36 000的蛋白条带.

关键词：水稻、L-半乳糖内酯脱氢酶、原核表达、抗体

所属期刊栏目：36

分类号：Q785(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金30870184

在线出版日期：2010-09-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：381-384,429