反映成骨细胞特异转录因子Runx2活性的细胞模型构建
目的 构建稳定表达由6OSE2启动子驱动的萤火虫荧光素酶的小鼠C2C12成肌细胞,并筛选出能定量反映Runx2活性的细胞株.方法 双酶切pUC57-6OSE2,获得启动子片段;插入到消化后的pGL4.14,构建真核表达载体;随后将其转染到C2C12细胞中;用潮霉素B筛选获得稳定转染的细胞株C2C12-6OSE2-Luc.将Runx2瞬时转染到该细胞株中,鉴定其对Runx2的响应性.利用不同浓度的IGF-I和BMP2处理,通过Luc报告基因的活性增高,筛选出能够响应BMP2的细胞株.结果 构建了p6OSE2-Luc表达载体,利用p6OSE2瞬时转染C2C12-Runx2细胞的相对荧光素酶活性是同样处置后的C2C12细胞的4倍.通过筛选获得C2C12-6OSE2-Luc细胞株.转染Runx2质粒后细胞的相对荧光素酶活性是转染空载体细胞的7倍.利用荧光素酶活性筛选出一株报告基因活性随BMP2处理增强的细胞株.结论 构建了能定量反映成骨细胞Runx2活性的细胞模型,可以用于进一步Runx2的转录活性及信号传导途径的研究中.
载体构建、C2C12成肌细胞、Runx2、OSE2
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R854(航空航天医学)
国家重点基础研究发展计划2011CB707704;国家自然科学基金30870589;中国航天医学工程预先研究项目SJ200809;国防基础预研项目A1620090025;中国航天医学基础与应用国家重点实验室项目SMFA200908
2011-09-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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