花生AhGPAT9与AhLPAAT4基因的原核表达及Western Blot分析

摘要：

酰基转移酶基因家族是甘油三酯合成的关键基因.本研究以前期克隆的AhGPAT9与AhL-PAAT4基因部分序列设计引物,构建原核表达载体,转化进大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE检测表明,重组蛋白在37℃,5h诱导条件下获得高效表达.重组蛋白经纯化和富集,对新西兰兔进行4次免疫,纯化获得的多克隆抗血清,通过间接ELISA检测,表明获得了效价比较高的多克隆抗体.通过对重组蛋白纯化后样品进行Western Blot分析,结果显示在纯化样品相应位置有明显信号,表明所制备的抗体具有很高灵敏度和特异性.并采用制备的抗体对AhGPAT9与AhLPAAT4蛋白在花生不同组织及种子不同发育时期的表达进行了Western Blot分析.为深入研究AhGPA T9与AhLPAAT4基因的功能提供了科学数据.

关键词：花生、AhGPAT9、AhLPAAT4、原核表达、多克隆抗体、蛋白质免疫印记法

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分类号：S565.2;Q786(经济作物)

资助基金：2014年国家“万人计划”青年拔尖人才;国家花生产业技术体系项目CARS-14;山东省自然科学基金项目ZR2014YL011,ZR2014YL012;国家自然科学基金项目31000728,31200211;山东省农业科学院青年科研基金项目2016YQN14;青岛市应用基础研究项目17-1-1-51-jch;青岛市民生计划项目14-2-3-34-nsh;山东农业科学院农业科技创新项目CXGC2016B02;山东省农业科学院青年英才培养计划

在线出版日期：2017-12-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：6-12,19