花生iso-ARah3基因克隆及多克隆抗体制备

摘要：

类花生致敏原3(iso-ARah3)是花生致敏原3的同系物,其表达活性与干旱及黄曲霉侵染相关.本研究通过RT-PCR技术从花生种子cDNA文库中克隆获得iso-ARah3的开放阅读框(ORF),全长1533bp,编码510个氨基酸,N端预测有20个氨基酸的信号肽序列.通过序列比对发现,该克隆序列有1处缺失突变,其N端210个氨基酸序列与胰蛋白酶抑制因子的同源性较高,达83.60%.通过构建原核表达载体pET28a-isoARah3,转化进大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE检测表明,融合蛋白His-isoARah3获得高效表达,分子量约54kD.His-isoARah3经纯化和富集,对新西兰兔进行4次免疫,纯化获得的iso-ARah3多克隆抗血清,通过间接ELISA检测,表明获得了效价比(1∶512000)很好的抗体.通过对融合蛋白的诱导前和纯化后样品进行Western Blot分析,结果显示仅在纯化样品相应位置(54kD)有明显信号,表明所制备的抗体具有很高灵敏度和特异性.本研究结果为深入研究花生iso-ARah3基因的功能奠定了基础.

关键词：花生、黄曲霉毒素、序列分析、原核表达、多克隆抗体

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分类号：S565.2;Q785(经济作物)

资助基金：2014年国家"万人计划"青年拔尖人才;国家花生产业技术体系项目CARS-14;山东省自然科学基金项目ZR2014YL011,ZR2014YL012;国家自然科学基金项目31200211;山东省农业科学院青年科研基金项目2016YQN14

在线出版日期：2017-03-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：5-13