泛素化相关蛋白纯化及体外泛素化体系的建立

摘要：

为构建泛素化相关蛋白的纯化方法以及利用纯化出的蛋白进行体外泛素化反应,采用分子克隆技术构建出pET-N-His-UBE1、pET-N-His-CDC34-C-His和pET-N-His-UBB-C-His载体,其中pET-N-His-UBE1载体来源于Addgene公司.将构建好的原核表达载体转化到BL21大肠杆菌中进行诱导表达,利用蛋白纯化技术纯化出相应的蛋白;将纯化出的泛素化相关的蛋白按照一定的比例混合,在ATP存在的条件下发生泛素化反应.成功建立了蛋白纯化和体外泛素化体系,即在细菌中纯化出E1、E2和泛素,在ATP存在的情况下使泛素结合到E2上.该体系的构建能为更好地探索细胞内蛋白的相互作用及人类疾病的治疗提供更多有价值的依据.

关键词：泛素化、蛋白纯化、体外蛋白泛素化

所属期刊栏目：34

分类号：Q74(生物小分子的结构和功能)

资助基金：国家自然科学基金项目31401185,81773018;湖北理工学院人才引进基金项目16xjz01R;湖北理工学院校级科研重点项目17xjz06A

在线出版日期：2018-03-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：58-62