人源RAD9 A基因真核表达载体的构建及其在肾癌细胞中的表达

摘要：

构建人源细胞周期检测点蛋白RAD9 A基因真核细胞表达载体，转染至肾癌细胞786-0中，使EGFP-RAD9 A融合蛋白得到高效表达。通过PCR法从293 T细胞cDNA中扩增RAD9 A基因编码区，经双酶切后连接入表达载体 pEGFP-N1多克隆位点，并对阳性重组子进行鉴定。将pEGFP -RAD9 A转染至肾癌细胞786-0中，荧光显微镜观察GFP-RAD9 A融合蛋白的表达及亚细胞定位， Western blot免疫印记法检测转染pEGFP-RAD9 A后的肾癌细胞786-0中的融合蛋白。通过定向克隆的方法获得了含有RAD9 A 基因编码区的真核表达载体 pEGFP -RAD9 A。与对照组相比，转染pEGFP-RAD9 A的肾癌786-0细胞中高效表达了EGFP-RAD9 A融合蛋白，后者定位在786-0的细胞核。构建的RAD9 A基因重组真核表达载体能够在肾癌细胞786-0中高效表达，为研究RAD9 A在肾癌发生发展中的作用奠定了基础。

关键词：周期检测点蛋白RAD9A、定向克隆、真核细胞表达载体、肾癌

所属期刊栏目：32

分类号：Q786(基因工程（遗传工程）)

资助基金：湖北理工学院大学生科技创新项目201510920019;湖北理工学院人才引进项目16xjz08R;湖北省教育厅科学技术研究计划青年人才项目项目000713。

在线出版日期：2017-02-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：56-60