采用易错PCR对粘质沙雷氏菌几丁质酶C进行定向进化

摘要：

以重组E. coli BL21(DE3) pLysS /pET22b-Chi C为亲本,采用易错聚合酶链反应(PCR)技术,对粘质沙雷氏菌几丁质酶C基因(Chi C)进行定向进化研究.经过两轮易错PCR后,建立突变体文库,进行平板初筛、包涵体复性及酶活检测复筛,获得一酶活较高的突变酶(Mut-Chi C),其催化活性为亲本重组酶的1.9倍,比活力为出发菌酶活的3.3倍.对突变酶的酶学性质进行初步研究,其最适pH值为5.0,最适温度为60 ℃,而出发菌该酶的最适温度为40 ℃.进化酶基因经DNA测序并通过软件与亲本型酶基因进行分析比对,表明突变酶Mut-Chi C基因发生点突变,使4处氨基酸被取代,且均为有义突变.

关键词：粘质沙雷氏菌、几丁质酶C、分子定向进化、易错聚合酶链反应、包涵体

所属期刊栏目：31

分类号：Q786;Q550.3(基因工程（遗传工程）)

资助基金：福建省自然科学基金资助项目C04010011

在线出版日期：2010-03-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：58-64