基于自噬途径探讨黄芪甲苷抑制糖尿病肾病系膜细胞NLRP3炎症小体活化通路及机制
目的:观察黄芪甲苷对高糖刺激的小鼠肾小球系膜细胞(SV40)核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化通路的抑制作用,并基于线粒体自噬途径探究其作用机制.方法:小鼠SV40细胞分别在含有0～80 μmol/L黄芪甲苷的DMEM培养基中体外培养48 h,通过细胞活力测试筛选出适宜的黄芪甲苷浓度进行后续实验.实验分为正常对照组(葡萄糖5.6 mmol/L)、高糖组(葡萄糖30 mmol/L)、黄芪甲苷低剂量组(葡萄糖30 mmol/L+黄芪甲苷10 μmol/L)、黄芪甲苷中剂量组(葡萄糖30 mmol/L+黄芪甲苷20μmol/L)、黄芪甲苷高剂量组(葡萄糖30 mmol/L+黄芪甲苷40 μmol/L),观察黄芪甲苷对小鼠SV40细胞的影响.结果:CCK-8检测结果提示黄芪甲苷浓度达到80 μmol/L时小鼠SV40细胞活力明显下降,故本次研究分别选用10、20、40 μmol/L作为低、中、高剂量黄芪甲苷进行后续实验.与正常对照组比较,高糖会降低小鼠SV40细胞活力并促进细胞凋亡,并可增加活性氧(ROS)与炎症因子水平,扩大炎症与氧化应激反应,LC3、Beclin1表达水平明显下调,自噬受到抑制.与高糖组比较,黄芪甲苷中、高剂量组细胞凋亡、炎症因子、ROS水平和NLRP3、Caspase-1表达水平均降低(P＜0.05或P＜0.01),细胞活力、LC3、Beclin-1表达水平均升高(P＜0.05或P＜0.01).透射电镜观察发现高糖会减少自噬体产生,黄芪甲苷组自噬体的数目明显多于高糖组.结论:高糖可导致小鼠SV40细胞处于微炎症状态,扩大氧化应激反应并激活NLRP3炎症小体,黄芪甲苷可以抑制NLRP3表达,并提高线粒体自噬,起到减缓DN疾病进展的作用.
糖尿病肾病;黄芪甲苷;核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体;线粒体自噬;微炎症;氧化应激;肾小球系膜细胞;小鼠
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R285.5(中药学)
河北省中医药管理局科研计划2019025
2021-11-12（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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