象皮生肌膏预处理的骨髓间充质干细胞源外泌体对人脐静脉内皮细胞血管生成的影响

摘要：

目的 探讨象皮生肌膏(Xiangpi Shengji Ointment,XPSJO)预处理的骨髓间充质干细胞源外泌体(XPSJO-Exos)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)血管生成的影响.方法 制备象皮生肌膏溶液,CCK-8法检测不同浓度象皮生肌膏(0、10、20、50、100、200μg/mL)对骨髓间充质干细胞活力的影响;提取骨髓间充质干细胞中的外泌体(exosomes,Ex-os)和XPSJO-Exos,分别设为Exos组和XPSJO-Exos组,另设对照组(HUVEC),通过透射电子显微镜观察Exos的形态,采用粒径分析仪检测其粒径;Western blot检测Exos标志性蛋白TSG101、CD9和CD63的表达;采用PKH67标记Exos,观察其能否被HUVEC所摄取;采用CCK-8、划痕实验、小管形成实验、ELISA法检测Exos对HUVEC细胞增殖、迁移、小管形成和血管内皮生长因子(vascu-lar endothelial growth factor,VEGF)浓度的影响;采用RT-qPCR检测血管生成相关基因ANG1、PDGF、bFGF、EGF的mRNA的表达.结果 10、20、50μg/mL的XPSJO与0μg/mL的XPSJO间细胞活力比较,差异均无统计学意义(P>0.05).与0μg/mL的XPSJO比较,100、200μg/mL的XPSJO细胞活力显著降低(P<0.01).在后续的实验中选用浓度50μg/mL作为药物使用浓度.Exos组和XPSJO-Exos组均有呈球形、膜结合囊泡的典型Exos结构(大多数Exos粒径约为120 nm,且能被HUVEC摄取),并均检测到Exos标志性蛋白TSG101、CD9和CD63的表达.与对照组比较,Exos组和XPSJO-Exos组在72、96 h时细胞活力均显著增强(P<0.01),HUVEC小管数量、迁移率、VEGF浓度均显著增加或升高(P<0.05,P<0.01).与Exos组比较,XPSJO-Exos组在72、96 h时细胞活力均显著增强(P<0.05),HUVEC小管数量、迁移率、VEGF浓度著增加或升高(P<0.05,P<0.01).结论 XPSJO-Exos能促进HUVEC的增殖、迁移及小管形成,并促进VEGF的分泌.

关键词：象皮生肌膏、外泌体、骨髓间充质干细胞、人脐静脉内皮细胞、血管生成、伤口愈合

所属期刊栏目：43

分类号：R269(中医外科)

资助基金：国家自然科学基金;湖南省中医药管理局重点课题;湖南省临床医疗技术创新引导项目;湖南中医药大学校级科研基金项目;湖南中医药大学中西医结合一流学科开放课题项目;湖南中医药大学中西医结合一流学科开放课题项目;长沙市自然科学基金

在线出版日期：2023-03-07（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：249-256