左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症胎鼠海马神经元NR及mEPSC的影响

摘要：

目的 探讨左归降糖解郁方对模拟糖尿病并发抑郁(diabetes mellitus with depression,DD)症状态下胎鼠海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体(n-methyl-d-aspartic acid receptor,NR)和微小兴奋性突触后电流(miniature excitatory postsynaptic current,mEPSC)频率及幅度的干预作用.方法 取胎鼠(16～18 d)的海马,进行分离纯化和培养,用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫细胞化学染色法鉴定.随机把海马原代神经元分6组:空白组、模型组、空白血清组、MK-801组、二甲双胍+氟西汀组、左归降糖解郁方组.根据分组,于空白组加10％的培养液;其他5组加15 mmol/L的高糖和50μmol/L的皮质酮予以造模;造模后,空白血清组、二甲双胍+氟西汀组、左归降糖解郁方组中分别加10％的空白血清、二甲双胍+氟西汀含药血清、左归降糖解郁方含药血清,MK-801组中加10 μmol/L的MK-801,同时干预18 h.蛋白NR2A、NR2B的表达运用高内涵细胞成像技术(high content analysis,HCA)检测;海马神经元细胞的mEPSC采用全细胞膜片钳技术来记录,并对比不同组间神经元细胞的mEPSC频率和电流幅度.结果 经镜下观察及NSE鉴定,所培养的细胞是海马神经元细胞,阳性率在95％以上.经HCA检测,空白组细胞的胞体明显,形态完整,突触之间形成丰富的神经网络.与空白组比,模型组和空白血清组的海马神经元细胞出现萎缩、突触断裂或神经网络消失,蛋白NR2A、NR2B的荧光值增强(P＜0.01);与空白血清组比,MK-801组、二甲双胍+氟西汀组、左归降糖解郁方组细胞突触间的连接恢复,蛋白NR2A、NR2B荧光值减弱(P＜0.01或P＜0.05).膜片钳结果显示,对比空白组,模型组、空白血清组的mEPSC频率和幅度上升(P＜0.01);与空白血清组比,MK-801组、二甲双胍+氟西汀组和左归降糖解郁方组的mEPSC频率和幅度下降(P＜0.01).结论 左归降糖解郁方抗DD大鼠海马神经元细胞受损的保护作用机制,可能在于其能够调控DD状态下的海马神经元蛋白NR2A、NR2B的表达及突触可塑性功能.

关键词：糖尿病并发抑郁症、海马神经元、突触可塑性、膜片钳、N-甲基-D-天冬氨酸受体、兴奋性突触后电流、左归降糖解郁方

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分类号：R285.5(中药学)

资助基金：国家自然科学基金面上项目;湖南省教育厅项目;湖南省自然科学基金青年项目;湖南中医药大学中医内科学重大疾病防治及成果转化教育部重点实验室开放基金资助项目;湖南中医药大学中医学国内一流建设学科开放基金资助项目

在线出版日期：2020-05-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：274-279