食管癌细胞Eca9706 DNA聚合酶β基因敲除载体的构建

摘要：

目的：构建食管癌细胞Eca9706 DNA聚合酶β（ DNA polβ）基因敲除载体，为DNA polβ基因敲除奠定基础。方法应用体细胞基因敲除技术的方法和原理，根据DNA polβ基因序列，设计并合成2对特异性引物（UP1/UP2和DOWN1/DOWN2），通过PCR扩增获得上游同源序列（UP）和下游同源序列（DOWN），其中上游同源序列长1268 bp，下游同源序列长2150 bp，将其插入骨架载体pcDNA3.1，从而构建了DNA polβ基因敲除载体pOUT-polβ，最后用PCR、酶切和测序进行鉴定。结果经过PCR筛选，限制性酶切及DNA测序鉴定，证实上游同源序列（ UP）和下游同源序列（ DOWN）2个片段插入正确。结论通过本研究所述方法，成功构建了用于食管癌细胞Eca9706 DNA polβ基因敲除载体pOUT-polβ。

关键词：基因敲除、DNA聚合酶、打靶载体、Eca9706细胞

分类号：R735.1;R730.23(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金资助项目编号30471952

在线出版日期：2014-08-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：185-189