PcDNA3.1-Tum-5基因真核表达载体的构建

摘要：

构建携带Tum-5基因真核表达载体PcDNA3.1-Tum-5.方法 利用巢式PCR扩增人胚肾细胞株HEK293 cDNA获得Tum-5基因,并利用DNA回收试剂盒进行回收;同时扩增、提取pcDNA3.1质粒,并将其与Tum-5基因分别进行EcoRV和XhoI双酶切,回收相应条带,通过T4DNA连接酶进行连接,转化DH5α感受态细胞,获得阳性克隆.获得质粒DNA后行KpnI和XhoI双酶切,克隆并测序酶切产物.结果 巢式PCR扩增出的产物与目的 基因大小相同;重组质粒经双酶切电泳分析,与预期结果一致;对连接点两端进行测序,结果显示接头两端序列连接正确,插入序列与载体读码框架相匹配.结论 本方法可以成功构建人Tum-5基因表达载体,为进一步研究Tum-5基因功能提供了理论依据.

关键词：肿瘤抑素、质粒、Tum-5基因、巢式PCR

所属期刊栏目：23

分类号：Q782;R735.2(基因工程（遗传工程）)

资助基金：福建省高等学校优秀人才支持计划项目NCETFJ-066

在线出版日期：2011-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：461-463