重组SV40大T抗原慢病毒表达载体的构建

摘要：

目的 构建含有重组SV40大T抗原基因的慢病毒表达载体pLentiGFP-Tag,转染真核细胞Eca-9706并检测SV40大T抗原基因在真核细胞内的表达.方法 以PCR方法从含有SV40大T抗原基凶的质粒上扩增出SV40大T抗原基因作为靶基因;将其连接至pGEM-T Easy载体上,并对靶基因进行DNA测序确认;再将靶基因与慢病毒表达载体pLentiGFP重组构建成为PLentiGFP-Tag;以脂质体介导转染真核细胞Eca-9706,观察慢病毒表达载体所携带的GFP基闪在细胞内的表达,使用RT-PCR检测SV40大T抗原基因在细胞内的表达水平.结果 成功克隆SV40大T抗原基因,经由DNA测序确认;成功筛选出含SV40大T抗原基因正插子的慢病毒表达载体pLentiGFP-Tag;转染真核细胞Eca-9706后48 h,观察到绿色荧光的广泛表达并检测出宿主细胞内高效表达的SV40大T抗原mRNA.结论 成功构建含SV40大T抗原基因的慢病毒表达载体pLentiGFP-Tag,并观察到SV40大T抗原在真核细胞中的成功表达.

关键词：SV40大T抗原、慢病毒载体、细胞永生化

所属期刊栏目：21

分类号：R730.231(肿瘤学)

在线出版日期：2008-12-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：384-387