TAp73γ在Saos-2细胞中定量诱导体系的建立

摘要：

目的利用Tet-On基因表达系统建立Saos-2/Tet-On/TAp73γ细胞株,通过强力霉素(Doxycycline,Dox)定量诱导TAp73γ基因的表达.方法将质粒pRevTet-On、pRevTRE-Luc和pRevTRE-TAp73γ分别转染PT67细胞,产生相应的逆转录病毒.RevTet-On病毒感染Saos-2细胞,经G418选择培养基进行培养并感染RevTRE-Luc,再应用荧光素酶活性检测筛选出高诱导倍数的Saos-2/Tet-On细胞克隆.最后该细胞株感染RevTRE-TAp73γ病毒,用强力霉素筛选出阳性细胞,在不同浓度Dox诱导下用Western blot分析Saos-2/RevTet-On/TAp73γ细胞中TAp73γ的表达.结果 Saos-2/RevTet-On克隆5当培养基中Dox浓度达到2.5mg/L时,荧光素酶相对活性值为5.3×106RLU/s,去除Dox时荧光素酶活性最弱,背景最低.Western blot结果显示在Saos-2/Tet-On 5细胞中TAp73γ蛋白表达随着Dox浓度的增加而增加.结论建立了Saos-2/Tet-On及Saos-2/Tet-On/TAp73γ细胞株,可利用四环素衍生物定时定量调整Saos-2细胞中TAp73γ基因的表达,为研究TAp73γ细胞内协同作用因子、进一步阐明细胞内p73蛋白的生物学行为提供了一个理想的研究平台.

关键词：Tet-On、基因表达系统、TAp73γ、Saos-2

所属期刊栏目：19

分类号：R730.231(肿瘤学)

在线出版日期：2006-08-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共3页

页码：273-275