siRNA靶向沉默Apelin基因对卵巢颗粒细胞Foxo1a的表达、Akt活性及细胞增殖的影响
目的 应用小分子干扰RNA(siRNA)靶向沉默脂肪因子Apelin,观察对卵巢颗粒细胞信号蛋白Akt、叉头转录因子Foxo1a基因的表达及颗粒细胞凋亡的影响.方法 选取因男方因素行(IVF)的不孕女性30例,于(OPU)日提取原代培养颗粒细胞,分别①加入Apelin10 ～ 8 mol/L于培养基内,分别于0min、5 min、10 min、15 min、30 min、60 min提取Akt、pAkt,利用定量PCR技术(RT - PCR)及蛋白印迹法(W - b)分别检测Akt、pAkt mRNA与蛋白的表达,探究Apelin因子对信号蛋白Akt的磷酸化作用;②转染沉默Apelin基因,利用信号阻断剂LY294002与HIMO分别阻断PI3K、Akt信号通路,48 h后利用MTT - OD法检测各组颗粒细胞增殖效果;③继续加入Apelin10 ～ 8 mol/L培养30 min后提取细胞蛋白,利用RT - RCR与W - b检测Akt、pAkt、Foxo1a mRNA水平与蛋白的表达.结果 ①Apelin 5 min开始对信号蛋白Akt磷酸化,30 min作用达到高峰.②Apelin siRNA、PI3K信号阻断剂LY294002、Akt信号阻断剂HIMO对颗粒细胞进行转染干预处理48 h后,细胞蛋白pAkt的表达在干预组与对照组间有显著差异(P＜0.05);③Foxo1a基因mRNA与蛋白的表达在细胞干预组与对照组间有显著差异,干预组显著高于对照组(P＜0.05);细胞干预组之间Foxo1a mRNA与蛋白的表达无统计学差异.④MTT - OD检测处理后的颗粒细胞,对照组与实验组细胞增值率有显著差异(P＜0.05),实验组OD值显著低于对照组,Apelin siRNA组与LY294002组、HIMO组之间OD值无统计学差异(P＞0.05).结论 Apelin通过活化信号蛋白Akt上调下游基因Foxo1a m RNA与蛋白的表达,进而影响颗粒细胞增殖效应.
Apelin、PI3K/Akt、Foxo1a、颗粒细胞、PCOS
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R711.6(妇产科学)
河南省医学科技攻关计划201702314
2018-08-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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