重组VEGF165基因腺相关病毒的包装和鉴定
目的 包装重组VEGF165基因的无致病性腺相关病毒,以其作为基因载体感染HUVEC细胞并检测其表达,并在体外检测病毒生物学活性.方法 从含有VEGF165基因的pET-32a(+)-VEGF165原核表达载体中扩增出VEGF165片段,构建重组骨架质粒pAAV-VEGF165.将此质粒和对照质粒pAAV-GFP分别与腺相关病毒包装质粒pAAV-Rc、辅助质粒pAAV-Helper用钙-磷共转法转染HEK293细胞,通过同源重组分别产生rAAV-VEGF165和rAAV-GFP重组腺相关病毒.通过real-time PCR法测定病毒滴度后,转染HUVEC细胞并检测其表达,并通过感染HUVEC来检测其促增殖作用.结果 扩增出的VEGF165片段成功构建至重组骨架质粒中,pAAV-VEGF165经双酶切和测序鉴定正确.病毒包装效率达90%以上,收获纯化rAAV-VEGF165病毒滴度达6.0×1010pfu/mL.重组腺病毒rAAV-VEGF165能够感染HUVEC细胞并得到显著性表达;与未转染组和GFP组相比,能够显著促进HUVEC细胞的增殖.结论 我们成功包装了重组腺相关病毒rAAV-VEGF165,它能够感染HUVEC细胞并高表达VEGF165蛋白,并具有促增殖作用,这为进一步开展VEGF165基因的基因靶向治疗奠定了基础.
VEGF165、重组腺相关病毒、基因治疗
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R373(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)
湖北省教育厅科研基金资助重点项目2004D006;湖北省卫生厅科研基金资助项目JX3B81;咸宁学院科研基金资助重点项目KY0322
2010-10-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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