大鼠骨髓来源树突状细胞的体外分离培养鉴定初步研究

摘要：

[目的]探讨建立一种简易、高效的体外分离培养、纯化大鼠骨髓来源树突状细胞(DC)的方法.[方法]采用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)+白细胞介素-4(IL-4)分离诱导大鼠骨髓来源造血前体细胞7d后得未成熟树突状细胞(immature dendritic cell,imDC),流式细胞仪检测免疫磁珠纯化前后imDC表面OX62阳性表达率.然后脂多糖(LPS)作用2d刺激imDC成熟得成熟树突状细胞(mature dendritic cell,mDC),流式细胞仪检测imDC及mDC细胞表面CD86、CD80、RT1B阳性表达率,ELISA法检测两组细胞的IL-12分泌水平,体外混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)测定两组细胞促淋巴细胞增殖的能力.[结果]免疫磁珠纯化后imDC表面OX62阳性表达率为91.9％,明显高于纯化前的82.8％(P＜0.05);imDC表面CD86、CD80、RT1B阳性表达率分别是11.48％、6.25％、77.2％,经LPS刺激成熟后的mDC表面CD86、CD80和RT1B阳性表达率分别为91.38％、93.54％、98.6％;imDC细胞的IL-12分泌水平为(36±9)pg/mL,明显低于mDC(228±27)pg/mL(P＜0.01);MLR结果中mDC组刺激T淋巴细胞增殖的能力明显高于imDC组.[结论]本实验通过细胞形态观察、表面分子标志和功能状态三方面相结合对所培养细胞进行鉴定,证实联合应用GM-CSF+ IL-4可体外诱导出高纯度、数量多的DC;通过免疫磁珠纯化可获得相对数量多、纯度高的DC以满足实验需要.

关键词：树突细胞、细胞培养技术、细胞分离、分离和提纯

所属期刊栏目：35

分类号：R394.26

资助基金：国家自然科学基金81273754

在线出版日期：2018-05-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：4-7