人巨细胞病毒UL123基因全长及其外显子4的克隆与表达

摘要：

[目的]克隆人巨细胞病毒(HCMV)UL123基因cDNA全长(ie1)及其外显子4(ie1-exon 4),构建原核表达重组质粒,诱导立即早期蛋白1(IE1)及其C-端86-491氨基酸(IE1-C86～491)表达,并鉴定表达产物.[方法]分别用RT-PCR和PCR法将ie1和ie1-exon 4从感染了HCMV的人胚肺成纤维细胞(HEL)中扩增出来,再分别克隆入原核表达载体pTWIN1上intein2的N端,转化大肠杆菌,经PCR、限制性酶切和测序鉴定阳性重组子,在低温和低IPTG浓度下诱导重组子表达可溶性重组融合蛋白rIE1/intein2和rIE1-C86～491/intein2,用SDS-PAGE和Western Blotting对表达产物进行鉴定.[结果]经PCR、限制性酶切和测序鉴定重组质粒pTWIN1/ie1和pTWIN1/ie1-exon 4构建成功,SDS-PAGE和Western Blotting分析表明融合蛋白在大肠杆菌中表达.[结论]成功克隆并表达了ie1和ie1-exon 4.

关键词：巨细胞病毒属/遗传学、基因表达、克隆、分子

所属期刊栏目：23

分类号：R373.9(医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学）)

资助基金：中国科学院资助项目30470088

在线出版日期：2006-08-11（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：817-820