利用GFP基因的黄瓜T-DNA插入突变体构建与快速鉴定

摘要：

为促进黄瓜功能基因组学研究,本研究开展了黄瓜T-DNA插入突变体快速构建与鉴定方法的研究.基于对黄瓜遗传转化体系农杆菌侵染活力和共培养条件的优化,本研究以绿色荧光蛋白GFP基因为插入片段,进行黄瓜T-DNA插入突变体的创制,并利用荧光显微镜进行快速鉴定,最后采用TAIL-PCR技术对突变体进行分子鉴定,确定突变位点.结果 表明,选取农杆菌侵染液在活化至12～ 18 h时具有最佳的活力和浓度,而最佳共培养温度为23℃.采用体式荧光显微镜快速鉴定,从2978个转化外植体中鉴定得到3株表达GFP再生苗,转化率为1.00‰.TAIL-PCR成功鉴定了一个突变体,其插入位点位于CsaV3_1G032940基因的第10个外显子中,该基因在拟南芥中的同源基因为AT4G18950(blue light-dependent H+-ATPase phosphorylation 1,BHP1),参与蓝光介导的气孔开放过程,但在正常栽培环境中该突变体的T0植株与野生型无差异.本研究结果对黄瓜功能基因组学研究具有重要意义.

关键词：黄瓜、T-DNA插入、GFP、TAIL-PCR

所属期刊栏目：35

分类号：Q943.2;S881.2;Q786

资助基金：创新项目PZCZ201719

在线出版日期：2021-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：1540-1547