海岛棉纤维均一化酵母双杂交文库的构建与GbTCP5互作蛋白的筛选

摘要：

为探究转录因子在海岛棉纤维中的生物学功能,以海岛棉8个时期的纤维为研究对象,利用SMART技术合成ds-cDNA,经DSN进行均一化处理,构建以pGADT7为载体的海岛棉纤维均一化酵母cDNA文库,利用酵母双杂交系统筛选与海岛棉GbTCP5互作的蛋白.根据克隆得到的GbTCP5基因的CDS区设计含有Nco Ⅰ、EcoRI酶切位点的引物,构建诱饵载体pGBKT7-GbTCP5.经自激活和毒性检测后共转化酵母菌株Y2HGold,筛选与GbTCP5互作的蛋白.实时荧光定量PCR显示,GbTCP5基因在纤维发育起始期和伸长期的表达量较高,且在花瓣和花萼中的表达量高于其他组织.文库的质量检测显示,构建的均一化cDNA文库库容为9.15×107 cfu·mL-1,重组率为100％,插入片段大小在500 ～2 000bp之间.诱饵载体pGBKT7-Gb TCP5通过酵母双杂交系统多次筛选、回转验证,最终确定了4个互作的蛋白,分别是GbTCP20、GbTCP42、GbTCP45和GbAHP1蛋白.海岛棉纤维均一化cDNA文库的构建和筛选,为进一步研究海岛棉TCP转录因子及其互作蛋白在纤维发育时期中的作用机制奠定了基础.

关键词：海岛棉、TCP、cDNA文库、酵母双杂交、转录因子

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资助基金：2016年自治区研究生科研创新项目XJGRI2016057;国家自然科学基金31560405;新疆农业大学作物学重点学科发展基金XNCDKY2017005

在线出版日期：2019-09-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共12页

页码：1928-1939