同步检测动物源性成分的五重PCR的条件优化和检出限分析

摘要：

为获得肉制品中牛、羊、猪、鸡、鸭等动物源性成分的快速高效多重PCR检测方法,利用5对牛、羊、猪、鸭和鸡等动物源性成分特异性PCR引物(靶基因序列来源于线粒体基因组),对多重PCR反应条件引物浓度和退火温度进行优化,并确定该检测方法的检出限.结果表明,多重PCR方法最佳反应条件为鸭源特异性引物浓度0.12 μmol·L-1,鸡源特异性引物浓度0.16 μmol· L-,猪源特异性引物浓度0.16 μmol·L-1,羊源特异性引物浓度0.32 μmol·L-,牛源特异性引物浓度0.24 μmol·L-1,退火温度58℃,dNTPs浓度0.20 mmol·L-1,Taq DNA聚合酶添加量5U,循环次数40.在最佳反应条件下,所建立的牛、羊、猪、鸡和鸭等5种动物源性成分多重PCR的gDNA检出限达到20 pg.应用优化后的多重PCR方法对21份市售肉制品样本进行盲样检测,验证鉴别方法的准确性,结果与现行标准的检测结果一致,掺假率达42.86％.本试验结果为肉制品中该5种动物源性成分的快速检测提供了技术支撑.

关键词：动物源性成分、五重PCR、优化、检出限

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资助基金：闵行区产学研合作计划项目2016MH256

在线出版日期：2018-04-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：506-514