玉米HVA22基因启动子的克隆与功能验证

摘要：

利用转基因技术转化利用外源抗性基因,可提高玉米对非生物逆境的抵抗能力,改良其在不良环境下的稳产性.但是,在过去的研究中,大多采用组成型启动子启动外源抗逆基因过量表达,虽然可以改良转基因株系的抗逆性,但其生长发育受到不同程度抑制,适应性代价较大.用非生物逆境诱导启动子,可培育出只在逆境胁迫下表达的转基因抗逆品种,避免正常条件下抗逆基因过量表达的不良影响.本研究以水稻HVA22蛋白质的氨基酸序列为探针,搜索玉米基因组同源mRNA序列HVA22,用PlantCARE软件分析并同源克隆其上游启动子序列,实时荧光定量PCR验证HVA22基因在非生物逆境胁迫下的差异表达,构建HVA22基因启动子HVA22s启动GUS基因的表达载体,基因枪法转化玉米愈伤组织,GUS染色检测启动活性.结果表明,玉米HVA22s启动子长度1478 bp,含有多种与非生物逆境应答相关的调控元件.HVA22基因在高温胁迫,以及脱落酸和乙烯诱导下上调表达.用HVA22s启动GUS基因转化的玉米愈伤组织,在脱落酸诱导、甘露醇模拟高渗处理、低温和高盐胁迫条件下,GUS染色均可显现靛蓝色斑点,说明HVA22s启动子确有非生物逆境启动功能,进一步验证其启动活性后可运用于玉米抗逆转基因研究.

关键词：非生物胁迫、功能、诱导表达、玉米、启动子

所属期刊栏目：28

资助基金：国家转基因重大科技专项2013ZX08003-005

在线出版日期：2014-05-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：560-568