小麦TaPDK基因的序列分析、原核表达及纯化
为研究TaPDK蛋白在小麦生理型雄性不育过程能量代谢途径中的调控机制.本试验提取小麦花药总RNA并反转录为cDNA,根据GenBank报道的已知小麦PDK基因序列设计引物,扩增TaPDK基因的编码区,采用生物信息学方法对其进行序列分析与功能预测,得出TaPDK的ORF为1095bp,编码364个氨基酸,蛋白分子量为41kD.进一步构建原核表达栽体PET23d-PDK,转化到大肠杆菌表达菌种E.coli BL21(DE3)中进行优化表达,融合蛋白经SDS-PAGE电泳和Western blot验证后利用亲和层析柱初步纯化,针对原核表达过程中出现的非特异蛋白,采用切胶处理的方法进行二次纯化.原核表达结果表明IPTG可诱导一个分子量约40kD的特异蛋白,且主要以包涵体的形式存在,优化表达条件为:28℃、0.8 mmol·L-1 IPTG、150r·min-1诱导表达4h,表达产物经两次纯化得到2mg的目的蛋白,为下一步制备多克隆抗体、寻找互作蛋白奠定基础.
小麦、TaPDK基因、原核表达、蛋白纯化、Western blot
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国家“863”计划2011AA10A106;国家自然科学基金31071477,31171611;高等学校博士学科点专项科研基金20090204110024;陕西省“13115”科技创新工程重大科技专项2010ZDKG-68
2013-11-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共9页
1081-1089
