铁皮石斛SCoT-PCR反应体系构建及优化

摘要：

采用正交设计和单因素试验相结合的方法，对铁皮石斛的SCoT-PCR反应中5个因素（DNA模板、Mg^2＋、dNTPs、Taq酶和引物）进行优化试验。建立了适合铁皮石斛既稳定且多态性高的SCoT-PCR的最佳反应体：201~1PCR反应体系中含有1×Buffer、30ngDNA模板、2．5mmol·L^-1Mg^2＋、0．15mmol。L^-1dNTPs、1．5UTaqDNA聚合酶和0．4iμmol·L“引物。对铁皮石斛的SCoT-PCR最佳反应体系的退火温度进行梯度试验，发现本试验引物S6的退火温度为54．5℃，且最适退火温度因引物而异。这一优化的SCoT-PCR反应体系在32份铁皮石斛材料的验证中表现出良好的稳定性和重复性。该优化的SCoT-PCR反应体系为进一步进行铁皮石斛种质鉴定、遗传图谱构建、基因定位和遗传多样性的分析奠定了技术基础。

关键词：铁皮石斛、SCoT、正交设计、单因素试验、体系优化

所属期刊栏目：26

分类号：S823(家畜)

资助基金：浙江省重大科技专项2009C12059

在线出版日期：2012-10-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：648-655