CEL I粗提物用于点突变检测的技术

摘要：

本文以含有单个错配的DNA异质双链为底物鉴定芹菜CEL I粗提物的错配切割酶学活性,并对影响其切割错配的反应条件进行优化,建立以CEL I粗提物为基础的点突变酶学检测技术.结果表明:自制的CEL I粗提物能有效识别和切割DNA异质双链中碱基错配.当异质双链DNA量恒定时,在一定的范围内CEL I粗提物用量对错配切割效果的影响不明显,由PCR产物形成的12μl异质双链DNA可用蛋白质总量约900ng的CEL I粗提物进行有效切割.常规PCR缓冲液与已报道的CEL I缓冲液的效果基本相近,实际工作中可选用PCR缓冲液作CEL I酶切反应液;缓冲液pH值对错配切割效果具有明显的影响,适宜pH约近中性(6.5～7.5).Zn2+对错配切割具有促进作用,但不是必需的,最适浓度为0.25mmol/L.CEL I粗提物切割错配的反应时间以42℃下酶切20min为宜.比较试验显示,本研究建立技术的点突变检测效果与Transgenomic公司试剂盒SurveyorTM基本相同.

关键词：CEL I粗提物、切割活性、条件优化、突变检测

所属期刊栏目：25

分类号：S4(植物保护)

资助基金：农业部农业公益性行业科研专项经费项目200803034;国际原子能机构研究合同项目R13631

在线出版日期：2011-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：37-42