小麦花药蛋白质组双向电泳技术体系的优化

摘要：

以小麦单核期花药为材料,比较了两种不同蛋白质提取方法TCA/丙酮法和酚提取法及不同的蛋白质裂解液组成对双向电泳的影响,并在蛋白质上样量和SDS-PAGE胶浓度等方面也进行了探索与优化.结果表明,采用TCA/丙酮提取法比用酚提取法提取的蛋白质所得的2-DE胶图谱上蛋白质点数增加,图谱背景也比较清晰;样品溶解于含有硫脲和TBP的蛋白质裂解液Ⅱ中,可显著提高蛋白质的溶解性,在2-DE图谱上可分辨出554个蛋白质点,比用蛋白质裂解液Ⅰ提取的蛋白多39个点.以TCA-丙酮法提取小麦花药组织中的蛋白,用蛋白质裂解液Ⅱ[7mol/L尿素、2mol/L硫脲、4%CHAPS、2%TBP、65mmol/L DTT、0.2%载体两性电解质(其中0.1%pH 3～10,0.1%pH4～6)]溶解蛋白,以pH4～7线性17cm的IPG胶条进行双向凝胶电泳,在上样量为800μg,13%SDS-PAGE胶浓度下,蛋白质得到了更好的分离,2-DE图谱上可分辨出631个蛋白点,图谱质量最佳.优化后的双向电泳技术体系,适合于小麦花药全蛋白质的双向电泳分析.

关键词：小麦、花药蛋白、蛋白质提取方法、蛋白质裂解液、双向电泳技术

所属期刊栏目：22

分类号：S51;TS2

资助基金：国家自然科学基金项目301705760;国家"863"重大专项计划2002AA207004;陕西省"13115"科技创新工程重大科技专项2007ZDKG020

在线出版日期：2008-11-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：404-409