KCTD10基因慢病毒过表达载体的构建及病毒包装

摘要：

目的:构建KCTD10基因表达载体并包装成病毒颗粒.方法:合成KCTD10基因全长片段,构建pEZ-Lv105-KCTD10载体,转化至大肠杆菌Stbl3中进行筛选.利用PCR及测序鉴定KCTD1-Lv105阳性克隆.将KCTD10-Lv105重组质粒和阳性对照eGFP-Lv105质粒同时与HIV包装质粒混合物共转染于293T细胞进行慢病毒包装,收集浓缩病毒颗粒.将所得病毒颗粒悬浮梯度稀释后感染293T细胞,利用Puromycin进行药筛滴度测定.结果:测序比对检测KCTD10-Lv105重组载体成功构建,荧光显微镜下观察eGFP-Lv105病毒包装成功,药筛检测KCTD10-Lv105浓缩病毒滴度为1.2×108TU/mL.结论:成功包装好过表达KCTD10的慢病毒颗粒,并为进一步研究KCTD10基因在胶质瘤的发生发展中的作用奠定了基础.

关键词：KCTD10基因、过表达、慢病毒载体

所属期刊栏目：15

分类号：R3416(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：湖南省自然科学基金项目2015JJ4036;湖南省教育厅重点项目15A134;怀化市科技计划重点项目2017X2102

在线出版日期：2018-05-02（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：20-23