Mir-148a 慢病毒表达载体构建及其稳定表达细胞系的筛选

摘要：

目的：构建人源性 mir-148a 慢病毒过表达载体，并筛选过表达 mir-148a 稳定细胞株 U251、U87、BT325，鉴定 mir-148a 在稳定细胞系中的表达水平。方法：设计并合成 mir-148a 上下游引物，PCR 扩增 mir-148a基因片段，经过酶切后克隆至慢病毒载体上，构建 pGC-FU-3FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin-mir-148a 过表达载体，在293T 细胞中与 pHelper1.0、pHelper2.0包装产生慢病毒，测定 mir-148a 慢病毒滴度。用构建好的慢病毒感染神经胶质瘤细胞系 U251、U87、BT325，用嘌呤霉素筛选，筛选稳定细胞系后 qRT-PCR 检测 mir-148a 的表达情况。结果：测序结果证明 mir-148a 慢病毒载体构建成功并获得了相应的慢病毒。嘌呤霉素筛选后获得稳定表达mir-148a 的 U251、U87、BT325细胞系，mir-148a 表达水平在三种细胞中分别升高167.38倍、7.19倍、11.46倍。结论：成功构建了 mir-148a 的慢病毒载体，筛选得到了 mir-148a 过表达稳定胶质瘤细胞系 U251、U87、B325。

关键词：mir-148a、慢病毒载体、神经胶质瘤细胞、q RT-PCR

所属期刊栏目：13

分类号：R735.7(肿瘤学)

资助基金：国家自然科学基金项目81472860

在线出版日期：2016-07-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：5-8