人类心脏发育候选基因KLHL31RNAi逆转录病毒载体系统的构建与鉴定

摘要：

目的:利用siRNA表达载体构建抑制人类心脏发育候选基因KLHL31表达的pSUPER RNAi载体( pSUPER-KLHL31).方法:化学合成一对编码短发夹RNA序列的、靶向心脏发育候选基因KLHL31的寡核苷酸链60个碱基,退火,克隆到经BglⅡ、Xho Ⅰ双酶切的pSUPER质粒上,构建重组RNAi质粒(pSUPER -KLHL31),通过酶切鉴定及测序分析验证构建效果,将正确构建的质粒转染大鼠心肌细胞H9c2,建立产生逆转录病毒的细胞克隆.通过Western blotting检测转染pSUPER-KLHL31后细胞中KLHL31蛋白的表达量.结果:pSUPER-KLHL31载体经酶切鉴定及测序分析,结果表明60个碱基成功插入到预计位点,且序列完全一致；重组载体转染包装细胞,可表达绿色荧光蛋白,表明包装成功；Western blotting检测结果显示转染pSUPER -KLHL31的细胞中KLHL31蛋白表达量明显降低.结论:靶向KLHL31的pSUPER RNAi载体构建成功,为进一步从分子水平探讨KLHL31在心脏发育中的功能奠定了基础.

关键词：心脏发育、KLHL31、pSUPER、RNAi

所属期刊栏目：8

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目81000035,31071999,30871340;湖南省研究生科研创新项目CX2009B110

在线出版日期：2012-01-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：5-8