Dnd1慢病毒表达载体的制备及鉴定

摘要：

目的:构建小鼠Dnd1慢病毒表达载体,以期在哺乳动物细胞中高效、稳定表达.方法:设计引物引入Age Ⅰ酶切位点,使用PCK方法从质粒pcDNA3.1-Dnd1中扩增小鼠Dnd1基因的编码区序列,对所扩增出的目的片段回收纯化.用In-Fusion技术将Age Ⅰ内切酶消化后目的片段交换连接入Age Ⅰ酶切的pGC-FU载体,构建Dnd1慢病毒表达载体pGC-FU-Dnd1.酶切验证并测序正确后,将质粒pGC-FU-Dnd1与慢病毒辅助包装裁体共转染293T细胞,Western-blot验证Dnd1在转染293 T细胞中表达.结果:通过PCK扩增获得了Dnd1基因,将Dnd1克隆到慢病毒转移质粒pGC-FU中,并在293T细胞中包装产生慢病毒颗粒.结论:成功构建了Dnd1慢病毒表达栽体,为进一步从分子水平探讨Dnd1功能奠定了基础.

关键词：Dnd1基因、慢病毒载体、293T细胞

所属期刊栏目：6

分类号：R737(肿瘤学)

资助基金：湖南师范大学青年优秀人才培养计划070626;长沙市科技计划资助k 0802084-31

在线出版日期：2010-04-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1-4,8