电场强度对线性丙烯酰胺毛细管电泳特性的影响
使用2种不同质量分数(4%和6%)的线性聚丙烯酰胺(Linear Polyacrylamide,LPA)作为筛分介质,对片段长度为80~584 bp 的标准DNA样品进行毛细管电泳. 利用激光诱导荧光方法检测信号,荧光染料为溴化乙啶. 改变电场强度从100~375 V/cm,得到电泳电流、迁移率、信号强度、半峰宽以及分辨率的变化曲线. 实验测得电场强度与电流有很好的线性关系,非线性度参数γ分别为0.999 44和0.998 76. 迁移率曲线与电场强度、DNA片段长度成复杂的函数关系,DNA的迁移率依赖于电场强度、筛分介质质量分数和片段长度;电场强度对信号强度的影响较小,筛分介质的质量分数对区带展宽有影响,因此也影响了信号强度,使用4% LPA比6% LPA区带展宽小,信号强度高,更适合分离片段长度≤600 bp的DNA样品. 电场强度对分辨率的影响十分复杂,增大电场强度并不能提高分辨率,为了提高分辨率,优化分离电场强度为125 V/cm,理论分析对实验起到了很好的指导作用.
毛细管电泳、电场强度、迁移率、分辨率
O657.8(分析化学)
国家自然科学基金资助项目60378042
2010-05-18(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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