猪圆环病毒3型TB Green Ⅱ实时荧光定量PCR检测方法的建立和应用

摘要：

为建立猪圆环病毒3型(Porcine circovirus 3,PCV3)快速、灵敏且特异的检测方法,针对PCV3全基因组的保守区域设计特异性引物,构建标准质粒,通过优化反应体系和反应程序,建立基于TB GreenⅡ的实时荧光定量PCR(qPCR)方法,并对其特异性、敏感性、重复性和可行性进行验证.结果显示,建立的TB Green Ⅱ qPCR检测方法特异性良好,在4.74×102～4.74×107拷贝/μL的标准质粒间具有良好的线性关系(R2=0.999).建立检测方法的最低检出限为10拷贝/μL,与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)无交叉反应,组内变异系数为0.33％～0.62％,组间变异系数为0.40％～0.73％.对收集的132份临床样品进行检测,PCV3 TB Green Ⅱ qPCR方法检出率为9.10％(12/132),高于PCV3常规PCR方法的检出率(4.55％,6/132).综上,建立的PCV3 TB Green Ⅱ qPCR检测方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于临床样品中PCV3感染的诊断、流行病学监测和实验室研究等.

关键词：猪圆环病毒3型、TB Green Ⅱ、实时荧光定量PCR、常规PCR、病毒检测

所属期刊栏目：52

分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：河南省科技攻关计划项目;新乡市科技攻关计划项目

在线出版日期：2023-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：135-142