猪瘟病毒Erns/E2融合蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立及评价

摘要：

为了建立猪瘟病毒(CSFV)血清抗体检测方法,将CSFV E rns和E2蛋白主要抗原区串联表达的编码核酸序列克隆至原核表达载体pET-32a中,转化大肠杆菌Rosetta TM2(DE3)构建重组表达菌.SDS-PAGE、Western blot鉴定及蛋白质可溶性分析结果显示,表达的E rns/E2蛋白分子质量约为43 ku,能够被CSFV阳性血清识别,主要以包涵体形式存在.通过快速稀释法复性了纯化的包涵体蛋白,复性效率大于40％.以纯化复性的E rns/E2蛋白为包被抗原,经优化各反应条件,建立了间接ELISA检测CSFV抗体方法(E rns/E2-ELISA).特异性、敏感性和重复性试验结果表明,建立的检测方法特异性强、敏感性高、重复性好.利用建立的E rns/E2-ELISA检测方法对121份随机采取的临床血清样本进行检测,与IDEXX CSFV抗体检测试剂盒相比,E rns/E2-ELISA检测方法符合率为86.78％,敏感性为92.11％,特异性为77.78％.利用建立的E rns/E2-ELISA检测方法和IDEXX CSFV抗体检测试剂盒同时评价CSFV C株疫苗免疫的4只30日龄健康仔猪抗体消长规律,可分别于免疫后7 d和14 d开始检出阳性,35～42 d抗体水平达到高峰,49～56 d抗体趋于稳定.

关键词：猪瘟病毒、Erns/E2、融合蛋白、串联表达、包涵体、复性、间接ELISA

所属期刊栏目：50

分类号：S855.3(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划;河南省科技攻关计划;河南省科技攻关计划

在线出版日期：2021-05-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共8页

页码：154-161