新城疫病毒HN蛋白的酵母表达及其活性鉴定

摘要：

为了制备新城疫病毒(NDV)HN蛋白并研究其免疫原性,将优化的HN基因胞外区插入毕赤酵母表达载体pPICZαA中,构建毕赤酵母表达载体pPICZαA-HN,并将其电转入毕赤酵母X-33感受态中,经PCR鉴定得到阳性转化子,甲醇诱导表达后,经SDS-PAGE和Western blot鉴定筛选出目的蛋白表达菌株;通过对诱导剂含量、诱导时间、培养基初始pH值和诱导温度进行优化,研究最佳表达条件;采用镍柱亲和层析对目的蛋白进行纯化,并用SDS-PAGE、Western blot和间接ELISA对目的蛋白进行鉴定;利用去糖基化酶PNGase F对目的蛋白进行处理,验证其糖基化修饰程度.结果显示,HN重组蛋白在毕赤酵母中成功表达,且在28℃ 条件下,培养基初始pH值为7.0,用0.5％甲醇诱导5 d,蛋白质表达量最高;通过镍柱亲和层析可获得纯度高于90％的重组蛋白;间接ELISA结果表明,重组蛋白活性良好;去糖基化试验验证了重组蛋白存在糖基化修饰.综上,利用毕赤酵母X-33成功表达了HN蛋白,且纯化产物纯度较高、活性良好,具有糖基化修饰.

关键词：新城疫病毒、HN蛋白、毕赤酵母、蛋白质纯化、蛋白质活性

所属期刊栏目：49

分类号：S855(动物医学（兽医学）)

资助基金：国家重点研发计划重点专项;河南省科技攻关计划项目

在线出版日期：2020-04-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：145-150