木槿ISSR-PCR反应体系的建立及优化

摘要：

建立木槿ISSR-PCR反应体系,为木槿种质资源的创新与鉴定提供理论基础.采用正交试验法,对影响PCR结果的Taq酶用量、Mg2+浓度、dNTPs浓度、模板DNA用量及引物浓度5个因素进行分析,采用单因素试验对退火温度进行筛选,并利用最佳体系对24个木槿品种进行扩增验证.结果表明,最优反应体系(25μL)中,含10×buffer(Mg2+free)2.5μL、Taq酶0.75 U、Mg2+2.0 mmol/L、dNTPs 0.10 mmol/L、模板DNA 100 ng、引物0.5μmol/L.PCR反应程序为94℃预变性2 min;94℃变性30 s,50℃退火30 s,72℃延伸1 min,34个循环;72℃延伸6 min,4℃保温.建立的体系对24个木槿品种能够扩增出清晰稳定、无拖带、多态性高的条带.

关键词：木槿、ISSR-PCR、反应体系

所属期刊栏目：48

分类号：S684(观赏园艺（花卉和观赏树木）)

资助基金：国家林业局948项目20150417;国家林业局风景园林学重点学科资助项目林人发[2016]21号;湖南省教育厅"十二五"重点学科资助项目2011-76

在线出版日期：2019-07-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：106-110