猪源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测试剂盒的研制

摘要：

根据GenBank中猪源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因floR的序列设计1对特异性引物,扩增出floR基因片段,克隆到pMD-18T栽体上,构建pMD-18T-floR阳性标准质粒.通过SYBR GreenⅠ荧光定量PCR反应条件的优化、荧光定量PCR标准曲线的建立、熔解曲线的分析及敏感性、特异性、重复性试验,建立针对猪源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因floR的荧光定量PCR检测方法,并研制出检测试剂盒,同时对从养殖场分离的156株大肠杆菌进行耐药表型和耐药基因检测.结果显示,研制的试剂盒灵敏度可达1.0×101拷贝,重复性好,特异性强,对大肠杆菌磺胺类耐药菌株、β-内酰胺类耐药菌株、大环内酯类耐药菌株检测均为阴性,熔解曲线分析,扩增产物的熔解温度为88.8～89.2℃,没有引物二聚体和非特异性扩增峰出现,耐药表型与耐药基因检测符合率为96.7％.表明研制的试剂盒适合于临床样品猪源大肠杆菌氟苯尼考耐药基因的检测.

关键词：猪源大肠杆菌、氟苯尼考、floR基因、SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR

所属期刊栏目：46

分类号：S855.1(动物医学（兽医学）)

资助基金：贵州省农业科技攻关项目黔科合NY[2015]3009-2号;贵州省重大科技专项黔科合重大专项字[2013]6014号;贵州省科学技术基金项目黔科合LH字[2014]7694号

在线出版日期：2018-04-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：152-156