哺乳动物促卵泡素氨基酸序列特征及其单克隆抗体的制备与鉴定

摘要：

为制备哺乳动物促卵泡素(FSH)单克隆抗体,比对了人类、家畜、部分野生动物、鼠类等哺乳动物FSH氨基酸序列,分析其种间同源性,结果发现,多种哺乳动物FSH β亚基氨基酸序列的同源性高于80％,且线性抗原表位高度保守.从奶牛垂体组织扩增FSH β亚基CDS片段,构建pET28a-FSH重组质粒,诱导表达FSH重组蛋白,免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞孔,取效价最高孔进行克隆和亚克隆,获得1株能够分泌抗FSH的单克隆抗体细胞株,命名为B4A5.B4A5细胞株经过数次传代培养、反复冻融后生长状态良好,且能够稳定分泌抗体.采用细胞株体外培养和小鼠腹水诱生法均制备了抗FSH的单克隆抗体,其效价分别为1:640、1:106.分别采用Western blot和间接ELISA法鉴定单克隆抗体的结合特异性和交叉反应性,结果显示,制备的单克隆抗体与FSH反应呈阳性,与促黄体素(LH)、促甲状腺素(TSH)、促乳素(PRL)、人绒毛膜促性腺激素(hCG)均无交叉反应性.综上,获得了1株能够稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其分泌的单克隆抗体可特异性结合FSH蛋白.

关键词：哺乳动物、促卵泡素、序列特征、单克隆抗体

所属期刊栏目：46

分类号：S857.2+1(动物医学（兽医学）)

资助基金：河南省教育厅高等学校重点科研计划项目16B230003;河南牧业经济学院学术带头人培养计划项目25000231

在线出版日期：2017-09-30（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：139-143