土壤微生物总DNA的V3可变区PCR反应体系优化

摘要：

为了优化以土壤微生物DNA为模板的PCR反应条件,采用E.Z.N.A.soil DNA kit试剂盒提取土壤微生物总DNA,对16S rDNA V3可变区的PCR反应体系和反应条件进行优化.主要从DNA模板用量、引物浓度、退火温度、热启动方式4个方面进行筛选试验,最后得出最适宜的土壤DNA扩增体系为:10.5 ng模板DNA、5μL 10×buffer、4 μL 2.5 mmol/L dNTP、10μmol/L引物各1.5 μL,2.5 UTaq酶,加无菌ddH2O补足至50 μL; PCR循环程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸70 s,29个循环；72℃延伸5 min.试验结果表明:选择热启动方式和合适的退火温度是获得高质量PCR产物的关键.

关键词：土壤微生物DNA、16S rDNA、V3区、PCR扩增、优化、热启动方式、退火温度

所属期刊栏目：41

分类号：S154.3(土壤学)

资助基金：吉林省烟草工业有限责任公司重大科技攻关项目JY2006012

在线出版日期：2012-04-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：65-68