丝状真菌米曲霉外源基因表达系统的构建

摘要：

以米曲霉(Aspergillus oryzae) RIB40的基因组DNA为模板,聚合酶链式反应(PCR)扩增得到启动子、终止子、筛选标记基因等表达元件,依次连接到载体pUC119上,构建了米曲霉的重组表达载体pNMA.将米赫根毛霉脂肪酶基因(RML)连接于pNMA的启动子下,得到表达载体pNMA-RML,通过ApaⅠ酶切线性化转化米曲霉宿主菌A.oryzae niaD300,得到整合型的阳性转化子A.oryzae ONL1.其培养7天的培养液的上清液在以三丁酸甘油酯为底物的平板上形成清晰的水解透明圈,碱滴定法酶活测定表明培养液酶活可达2.5U/mL,培养液上清液的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)图谱在相对分子质量32500处有RML的特征条带.这说明RML已经在米曲霉中成功表达,同时证明所构建的米曲霉外源基因表达系统是有效的.

关键词：米曲霉、外源基因表达、米赫根毛霉脂肪酶、硝酸盐还原酶、标记基因

所属期刊栏目：37

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金资助项目30770057

在线出版日期：2009-09-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：84-90